纸上清晰的步骤和预期，即将迎来现实的检验。


    项目的核心，是研究特殊设计的微结构基底对细胞内微管动态行为的影响。


    第一步，是获取这些微结构基底，他订购的芯片。


    几天后，一个不大的快递箱送达。李师姐签收后，直接递给了陈佑华。


    “陈佑华，你订的芯片，B供应商的。”


    李师姐指了指箱子。


    “新耗材，尤其这种定制件，使用前需要做初步质检。你跟我来。”


    陈佑华跟着李师姐走到一台普通的光学显微镜旁。


    李师姐拆开包装，取出几片透明的薄片，外观光滑平整。


    她取出一片，滴上封片介质，小心盖上盖玻片，固定在载物台上。


    “肉眼看着没问题，但微观结构需要确认。”


    李师姐调好焦距，示意陈佑华观察。


    “主要检查表面有无明显划痕、污染、气泡，以及微结构的均匀性和完整性。”


    屏幕上呈现出排列密集的微小圆柱阵列。


    李师姐移动载物台。


    “这是你要求的规格，直径和间距都标注了。


    重点看边缘区域和随机点，是否有结构缺陷。”


    陈佑华仔细检视。


    大部分区域符合要求，但在一个边缘区域，发现几排圆柱高度明显低于周围，排列也出现扭曲变形。


    “这里有缺陷。”他指出。


    “记录位置和具体问题。”


    李师姐点头。


    “B供应商的工艺稳定性相对A供应商稍差，这类局部瑕疵在预算内样品中不算罕见。


    这也是为什么先期采购用于流程验证。关键实验再用A供应商的高精度芯片。”


    陈佑华在专门的记录本上详细写下。


    “样品编号B-003，区域C4，柱体高度不均，阵列扭曲。”


    有了芯片，尽管部分有瑕疵，下一步是将细胞培养在这些基底上，并对细胞内的微管进行荧光标记，以便进行长时间的活细胞成像观察。


    陈佑华没有直接在芯片上尝试，他先在普通的玻璃底培养皿中进行预实验，目标是稳定地获取清晰的微管动态影像。


    他严格按照操作规程。


    配制培养基、预热、消化细胞、精确计数、重悬、铺板……动作尚显生疏，但步骤无误。


    然而，结果不尽人意。


    第一次长时间成像尝试，目标时长3小时。


    现象：成像开始约半小时后，细胞逐渐脱离基底，形态改变，荧光信号持续减弱直至消失。


    分析：细胞贴壁不牢固，可能与铺板密度、血清浓度有关。且激光照射导致荧光染料发生光漂白。


    第二次尝试。


    调整：降低激光功率，优化铺板条件，通过增加细胞密度、调整血清比例。


    现象：细胞贴壁改善，但细胞内标记的微管荧光信号微弱，图像模糊，无法用于后续追踪分析。


    分析：荧光标记效率低，染色时间、染料浓度或细胞活性可能存在问题。


    第三次尝试。


    调整：优化荧光染色步骤，通过延长染色时间、更换染料批次。


    现象：荧光信号增强，但背景出现非特异性荧光颗粒干扰。成像约一小时后，因培养环境微小波动，温度或CO2浓度的原因，细胞状态明显变差，形态收缩。


    分析：染色背景控制不佳，环境稳定性控制需进一步加强。


    陈佑华关闭成像软件，看着屏幕上那些无法使用的图像序列。


    旁边的废液缸里，废弃的培养皿增加了几个。


    计划书上细胞传代与荧光标记、活细胞成像的步骤，在实际操作中充满了不确定性和需要反复调试的细节。


    王哲端着咖啡走过来，瞥见陈佑华凝重的神色和屏幕上失败的图像。


    “又不行？”


    “嗯。”陈佑华简短回应。


    “正常，”


    王哲语气平静。


    “我刚接触这些时，失败次数只多不少。


    活细胞成像对细胞状态、环境控制、参数设置要求都很苛刻。


    哪一环没做好，结果就不理想。”


    他放下杯子，看向屏幕。


    “这次具体什么情况？脱落？信号弱？还是状态差了？”


    “几种情况都遇到了。”陈佑华回答。


    “都遇到过就对了，经验是试出来的。”王哲说。


    “关键是把每次操作的参数、细胞来源、培养基批次、操作时间点都详细记录下来。


    失败本身也是信息，分析原因比盲目重复重要。”


    他留下半包能量棒。


    “补充点体力。慢慢来，把每个变量摸清楚。”


    在进行细胞状态调试的同时，陈佑华在王哲指导下，持续练习共聚焦显微镜的操作，特别是长时间序列扫描的稳定性控制。


    “手部动作要稳，但不要过度紧张。”


    王哲站在旁边，看着陈佑华全神贯注地调整着精密的焦距旋钮，手指因用力而略显僵硬。


    屏幕上，一个表达绿色荧光蛋白标记微管的细胞内部结构清晰可见。


    王哲要求他练习设置并执行超过两小时的连续扫描。


    “长时间成像的核心是稳定性。


    仪器本身要稳，操作环境要稳，操作者也要稳。


    视野漂移是常见问题，需要及时手动微调，不能完全依赖自动校正功能。


    细胞自身也会活动，增加了不确定性。”


    陈佑华屏息凝神，努力控制着手部细微动作，紧盯屏幕。


    保持高度专注和精确控制带来的精神压力远超预期。


    一次练习中，视野内一个亮点快速移动，陈佑华下意识手一抖，图像瞬间模糊。


    “注意突发情况，”


    王哲提醒。


    “不要慌，稳住手慢慢调整回来。


    必要时暂停序列，重新定位对焦，损失部分时间总比整段数据无效好。”


    陈佑华依言暂停，重新定位，再次启动。


    整个过程需要极大的耐心和专注力。